細胞凋亡檢測技術服務

服務說明：

細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面，目前早期識別仍有困難。這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V是一種Ca+依賴的磷脂結合蛋白，最初發現是一種具有很強的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性。對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所獨特的，也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。因此，可以建立一種用Annexin V結合在細胞膜表面作為凋亡的指示并結合一種染料排除試驗以檢測細胞膜的完整性的檢測方法。目前普遍使用的Annexin-V試劑盒是依據Annexin-V-FITC和磷脂酰絲氨酸（PS）特異結合的特性，與PI同時染色來測定細胞凋亡。

客戶須知：

客戶需要檢測細胞周期及目的載體帶綠色熒光時檢測晚期調亡可做PI檢測目的載體不帶熒光時才可以做Annexin-V-FITC雙標檢測調亡，客戶需購買 Annexin V-FITC調亡檢測試劑盒。

實驗方法：

1．凋亡細胞的制備：轉染目的載體48h細胞樣品，用PBS洗兩遍，調整待測細胞的濃度為2 ×10⁶/ml，備用。
2．200μl細胞懸液加入1ml冷PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm 4℃離心10分鐘，棄上清。
3．重復步驟2兩次，加入10μl PI染料避光靜置10分鐘。
4．將細胞重懸于200μl 標記緩沖液。
5．加入10μl Annexin V-FITC，輕輕混勻，避光室溫反應15分鐘或4℃反應30分鐘。
6． 加入300μl標記緩沖液，立即上機（流式細胞儀）或熒光顯微鏡觀察檢測。

實驗儀器：

服務要求：

請認真填寫細胞凋亡檢測技術服務委托書，并聯系技術人員將委托單發送至：support@novland.com.cn。

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